o Diagnóstico de preferência oferece a possibilidade de teste genético de óvulos femininos como parte da fertilização in vitro (FIV). Os exames são realizados nos cromossomos do 1º e 2º corpos polares, que surgem durante a 1ª e 2ª meiose após a introdução de um espermatozóide masculino no óvulo. A vantagem desse método é que de iure não é um diagnóstico de pré-implantação (PGD), pois o exame é realizado antes da fusão dos núcleos feminino e masculino, de modo que o diagnóstico preferencial é permitido em alguns países onde o PGD é proibido.
O que é diagnóstico de fertilização preferencial?
Os diagnósticos de fertilização tornam possível detectar aberrações cromossômicas no genoma haplóide da célula-ovo feminina no contexto da fertilização in vitro (FIV). Acima de tudo, podem ser detectados desvios numéricos de certos cromossomos (aneuploidia) e anormalidades de certos genes que causam doenças hereditárias. Quando um espermatozóide masculino é introduzido no citoplasma do óvulo durante a fertilização in vitro, a primeira e a segunda meiose (meiose I e II) do óvulo são ativadas.
A divisão cria duas células “supérfluas”, os corpos polares, que têm o mesmo conjunto de cromossomos que o próprio óvulo. Os corpos polares, que normalmente seriam decompostos pelo corpo, são coletados por biópsia do corpo polar para examinar os cromossomos. Como os diagnósticos de prefertilização são sempre realizados nos corpos polares, o procedimento também é denominado diagnóstico de corpos polares (PKD). A vantagem do método de exame é que também pode ser realizado em alguns países onde o diagnóstico pré-implantação (PGD) é proibido, porque o exame é realizado no genoma do óvulo quando os núcleos celulares do espermatozóide e do óvulo ainda não se fundiram.
A desvantagem é que apenas aberrações cromossômicas do genoma materno podem ser examinadas. Os cromossomos do esperma que foi introduzido no citoplasma do óvulo não podem ser detectados com este método. As doenças ligadas a Y não podem ser reconhecidas porque o conjunto de cromossomos haplóides da célula-ovo não pode conter um cromossomo Y.
Função, efeito e objetivos
Como parte do diagnóstico de pré-fertilização na forma de um exame genético do corpo polar, anomalias numéricas (aneuploidia) podem ser detectadas em certos cromossomos do genoma materno, bem como translocações nas quais segmentos cromossômicos foram separados e reintegrados no lugar errado. Além disso, podem ser diagnosticadas mutações do gene ligadas ao X que são herdadas da mãe e são baseadas na mutação de um único gene (doença monogênica). Isso pressupõe que a potencial doença hereditária deve ser conhecida para que seja possível examinar especificamente um determinado gene no cromossomo X.
No caso de herança recessiva, há uma chance de que o cromossomo X do corpo polar - e, portanto, também o cromossomo X do óvulo fertilizado, contenha o alelo saudável do gene correspondente. O procedimento em si inclui uma biópsia de corpo polar, na qual os dois corpos polares haplóides são removidos da célula-ovo e os cromossomos são então submetidos ao teste FISH (hibridização fluorescente in situ). A biópsia dos corpos polares é um enorme desafio para o laboratório que realiza o trabalho porque a identificação e o isolamento dos corpos polares requerem uma certa experiência. Para o procedimento de teste FISH, as chamadas sondas de DNA estão disponíveis para cromossomos selecionados, que se conectam aos cromossomos haplóides correspondentes porque possuem a sequência de aminoácidos complementar.
As sondas de DNA são marcadas com diferentes cores fluorescentes, para que os cromossomos possam ser identificados com a ajuda de um software especial e contados em um processo automático. A maioria das aberrações cromossômicas, como aneuploidias e mudanças cromossômicas dentro de um cromossomo, são letais. Isso significa que a FIV não forma um zigoto, ou que o embrião é rejeitado após ser transplantado para o útero, ou que ocorre um aborto espontâneo precoce ou tardio. Uma vez que a frequência de aberrações cromossômicas nos óvulos femininos aumenta com a idade, um objetivo importante do diagnóstico de preferência pela fertilização é uma seleção positiva dos óvulos fertilizados. Apenas óvulos fertilizados com - tanto quanto reconhecível - um genoma intacto são transplantados de volta para o útero.
A seleção positiva aumenta a taxa de gravidez após a fertilização in vitro e reduz a taxa de ovos fertilizados rejeitados e o número de abortos espontâneos. Outro objetivo é excluir doenças hereditárias baseadas em aberrações cromossômicas ou certos defeitos genéticos no óvulo fertilizado replantado desde o início por meio da seleção positiva dos óvulos fertilizados. As doenças hereditárias típicas que podem ser excluídas pelo teste são fibrose cística, atrofia muscular espinhal e anemia falciforme.
Riscos, efeitos colaterais e perigos
O diagnóstico de fertilização é realizado fora do corpo e, portanto, não envolve riscos físicos adicionais para a mulher em questão. O risco de lesão física e infecção associado à remoção dos ovos é baixo. Em contraste com o PGD, que também inclui um exame de cromossomo usando o teste FISH, o diagnóstico de pré-fertilização só pode examinar o cromossomo e o material genético da mãe.
Isso significa que um teste FISH negativo, no qual nenhuma aberração cromossômica ou genética foi diagnosticada, pode despertar expectativas excessivamente positivas nos pais em relação ao curso da gravidez e ao nascimento subsequente. As aberrações cromossômicas do genoma paterno e possíveis anomalias existentes no cromossomo Y, que podem desencadear uma doença hereditária relacionada ao sexo, não são registradas. Nesse aspecto, o diagnóstico de prefertilização é ainda mais incompleto do que o PGD, no qual todo o genoma do embrião em estágio de blástula pode ser examinado.
No entanto, mesmo com PGD negativo, não se pode excluir a existência de defeitos genéticos no genoma do embrião que podem causar desenvolvimentos indesejáveis e possivelmente deficiências após o nascimento. O teste FISH só pode referir-se a cromossomos e genes selecionados.
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