A evidência de estruturas de tecidos, anticorpos e patógenos por meio da marcação imune é popular, moderna e precisa. Imunofluorescência refere-se à marcação imunológica com anticorpos fluorescentes preparados que brilham sob a luz ultravioleta.
No Detecção de imunofluorescência direta o substrato é examinado diretamente com anticorpos luminosos, sem anticorpos primários ou antígenos artificiais.
O que é detecção de imunofluorescência direta?
A detecção por imunofluorescência direta é um método diagnóstico baseado no conhecimento da imunologia, imunomarcação e imunohistoquímica. O foco aqui é a capacidade dos anticorpos de se ligarem a pontos específicos no tecido ou a antígenos em um soro. Esses lugares são epítopos.
No diagnóstico bioquímico, existem anticorpos artificiais ou miméticos (singular: mimético) que permitem que essas ligações anticorpo-antígeno sejam marcadas por fluorescência ou radioatividade. Os conjugados de anticorpos artificiais ligam-se, por um lado, aos epítopos e, por outro lado, têm um marcador fluorescente no caso de imunofluorescência. Esta é uma alternativa ao uso de marcadores radioativos. O que há de especial na detecção direta por imunofluorescência em comparação com a detecção indireta é que o anticorpo que se liga ao epítopo do antígeno no material examinado também representa o anticorpo conjugado com o marcador fluorescente. Não são necessários anticorpos adicionais para a detecção direta.
A fluoresceína, que brilha sob a luz ultravioleta, e o isotiocianato de fluoresceína (FITC) são usados como corantes para fazer os conjugados de anticorpos artificiais em imunofluorescência. Até agora parece um pouco complicado, mas a detecção de imunofluorescência direta é o método de diagnóstico de laboratório médico padrão para uma ampla variedade de questões médicas. Os anticorpos com o corante fluorescente estão prontos para venda.
Função, efeito e objetivos
A detecção direta por imunofluorescência está disponível para exames de tecido para a coloração de certas estruturas no tecido. Mas eles também estão disponíveis para células individuais. A citometria de fluxo desempenha um papel importante aqui. Finalmente, existem os imunoensaios de fase sólida e líquida. Os exames de imunofluorescência de tecidos são especialmente importantes em oncologia, isto é, o tratamento médico de doenças cancerosas.
Antígenos tumor-específicos no tecido tumoral podem ser detectados diretamente com imunofluorescência. Esses exames em amostras de tecido de tumores são freqüentemente importantes para descobrir de onde as metástases existentes vieram no corpo, ou para fazer um julgamento se um tumor é benigno ou maligno. O exame de células individuais com detecção de imunofluorescência direta é usado para encontrar antígenos de vírus, antígenos bacterianos e outros epítopos.
Por exemplo, você pode descobrir se as células estão infectadas por um vírus e em que estágio do ciclo de infecção as células se encontram. O nome FACS (= Fluorescence-Activated Cell Sorting) é um método de citometria de fluxo altamente eficiente, no qual as células marcadas com fluorescência são distribuídas em diferentes tubos de ensaio, dependendo do tipo de cor. Este procedimento é importante em imunologia, hematologia e doenças infecciosas.
Os imunoensaios de imunofluorescência permitem a detecção direta de toxinas ambientais, organismos geneticamente modificados e certos aditivos nos alimentos. Nesta configuração experimental, há sempre uma fase sólida e uma fase líquida. Vários patógenos, incluindo o vírus HIV que causa a AIDS, também podem ser detectados diretamente. Ao detectar doenças infecciosas e autoimunes, no entanto, geralmente é uma questão de detectar anticorpos em vez de antígenos. Essas são as moléculas de defesa formadas pelo sistema imunológico do corpo. De acordo com a definição apresentada aqui, tais provas não são, portanto, provas diretas, uma vez que os anticorpos fluorescentes não se acoplam diretamente aos antígenos do próprio corpo, mas aos antígenos do arranjo do teste.
Esses antígenos na configuração experimental são, por sua vez, ligados aos próprios anticorpos do corpo. A detecção direta por imunofluorescência para infecções comuns, por exemplo, vírus HIV e clamídia, é usada apenas em testes especiais de detecção e confirmação. Existem testes para muitas outras doenças. Na maioria das situações, a detecção indireta de anticorpos é mais adequada para doenças infecciosas, pois o próprio sistema imunológico do corpo tem uma capacidade engenhosa de lembrar infecções anteriores. Em outras situações, a detecção direta de antígenos e a detecção indireta de anticorpos se complementam. Os últimos mostram que já ocorreu uma infecção, enquanto os primeiros fornecem informações mais precisas sobre o estado atual da atividade do patógeno.
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Com a detecção de imunofluorescência direta, como com todas as evidências médicas, existem dois riscos: o risco de um resultado falso positivo e o risco de um resultado falso negativo. Resultados falsos e positivos causam desconforto psicológico e grande estresse para o paciente.
Portanto, procedimentos de teste adicionais são adicionados aos resultados positivos, especialmente se o diagnóstico levar a mudanças drásticas na vida. O risco de um resultado falso e negativo é que o paciente não aprenda atempadamente sobre a ameaça à sua própria saúde e talvez até à saúde pública. Portanto, é bom fazer muita pesquisa e fazer e oferecer um grande número de diferentes detecções diretas por imunofluorescência prontas para venda. Juntamente com outros métodos de detecção direta e indireta de doenças e patologias, isso aumenta a precisão do diagnóstico.
A detecção direta é baseada no conjugado do anticorpo, que por um lado se liga aos epítopos dos antígenos e, por outro lado, também causa a fluorescência. Esse produto é, portanto, usado apenas em um tipo de procedimento de teste e não é usado para outros tipos de procedimento de teste.Esta é uma diferença importante de procedimento para a evidência indireta, em que os anticorpos fluorescentes são precedidos por anticorpos primários para ligação ao epítopo. O conjugado de anticorpo é, portanto, adequado para diferentes testes. Essa diferença de procedimento é diferente da diferença médica entre a detecção indireta de anticorpos e a detecção direta de antígenos.
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